Dithiothreitol (DTT) كۆپ ئىشلىتىلىدىغان ئازايتىش دورىسى بولۇپ ، يېڭى يېشىل خۇرۇچ دەپمۇ ئاتىلىدۇ.ئۇ كىچىك تىپتىكى مولېكۇلا ئورگانىك بىرىكمىسى بولۇپ ، ئىككى مېركاپتان گۇرۇپپىسى (-SH) بار.خۇسۇسىيىتى ۋە مۇقىملىقى تۆۋەنلىگەنلىكتىن ، DTT بىئوخېمىيە ۋە مولېكۇلا بىئولوگىيە تەجرىبىسىدە كەڭ قوللىنىلىدۇ.
DTT نىڭ ئاساسلىق رولى ئاقسىل ۋە باشقا بىئولوگىيىلىك مولېكۇلادىكى دېسففىدلىق باغلىنىشنى ئازايتىش.دېسفىلفىدلىق باغلىنىش ئاقسىلنىڭ قاتلىنىشى ۋە مۇقىملىقىنىڭ مۇھىم تەركىبىي قىسمى ، ئەمما بەزى تەجرىبە شارائىتىدا ، مەسىلەن SDS-PAGE ئانالىزى ، ئاقسىلنى قايتا ھاسىل قىلىش ۋە قاتلاش قاتارلىق تەجرىبە شارائىتىدا ، دېسففىدلىق باغلىنىشنى ئىككى تىئول گۇرۇپپىسىغا ئازايتىپ ، بوشلۇق قۇرۇلمىسىنى يېشىش كېرەك. ئاقسىل.DTT دېسففىدلىق زايوم بىلەن ئىنكاس قايتۇرۇپ ، ئۇلارنى مېركاپتان گۇرۇپپىسىغا ئازايتالايدۇ ، شۇڭا ئاقسىلنىڭ بوشلۇق قۇرۇلمىسىنى ئاچىدۇ ۋە تەھلىل قىلىش ۋە كونترول قىلىشقا قولايلىق يارىتىدۇ.
DTT يەنە فېرمېنتنىڭ ئاكتىپلىقى ۋە مۇقىملىقىنى قوغداشقا ئىشلىتىلىدۇ.بەزى ئېنزىم كاتالىزلانغان رېئاكسىيەلەردە ، ئوكسىدلىنىش ئارقىلىق ئېنزىمنىڭ پائالىيىتى تۆۋەنلىشى مۇمكىن.DTT ئوكسىدلىنىشقا قارشى ماددىلار ئارقىلىق ئۇلارنى زىيانسىز ماددىلارغا ئازايتالايدۇ ، بۇ ئارقىلىق ئېنزىمنىڭ پائالىيىتى ۋە مۇقىملىقىنى قوغدايدۇ.
ئەنئەنىۋى تۆۋەنلىتىش دورىسى β-mercaptoethanol (β-ME) غا سېلىشتۇرغاندا ، DTT تېخىمۇ بىخەتەر ۋە مۇقىم ئازايتىش ۋاكالەتچىسى دەپ قارىلىدۇ.ئۇ سۇ ئېرىتمىسىدە مۇقىم بولۇپلا قالماي ، يەنە يۇقىرى تېمپېراتۇرا ۋە كىسلاتا ئاساسى شارائىتىدا تۆۋەنلىتىش خۇسۇسىيىتىنى ساقلايدۇ.
DTT نى ئىشلىتىش بىر قەدەر ئاددىي.ئادەتتە ، DTT ماس كېلىدىغان بۇففېردا ئېرىپ ئاندىن تەجرىبە سىستېمىسىغا قوشۇلىدۇ.DTT نىڭ ئەڭ ياخشى قويۇقلۇقى كونكرېت تەجرىبىگە ئاساسەن بېكىتىلىشى كېرەك ، ئادەتتە 0.1-1mM ئارىلىقىدا ئىشلىتىلىدۇ.تۆۋەن قويۇقلۇق ھۈجەيرىلەرنىڭ ئۆسۈشىگە پايدىسىز تەسىرلەرنى ئازايتىدۇ ھەمدە نىشانلىق ئاقسىلنىڭ ھەددىدىن زىيادە بېسىم قىلىشى سەۋەبىدىن سىتاتسىك زەھەرلىنىشنى ئازايتالايدۇ.قويۇقلۇقى يۇقىرى ھۈجەيرە مېتابولىزىم يۈكىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىپ ، ھۈجەيرىلەرنىڭ ئۆسۈشى ۋە ئىپادىلەش ئۈنۈمىگە تەسىر كۆرسىتىشى مۇمكىن.
ئەڭ ياخشى قويۇقلۇقىنى بەلگىلەشنىڭ ئۇسۇلى ئوخشىمىغان قويۇقلۇقتا IPTG كىرگۈزۈش سىنىقى ئېلىپ بېرىش ئارقىلىق نىشانلىق ئاقسىلنىڭ ئىپادىلىنىش دەرىجىسىنى باھالاش بولىدۇ.كىچىك تىپتىكى مەدەنىيەت سىنىقى بىر قاتار IPTG قويۇقلۇقى (مەسىلەن 0.1 mM ، 0.5 mM ، 1 mM قاتارلىقلار) ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلسا بولىدۇ ، نىشاندىكى ئاقسىلنىڭ ئىپادىلىنىش دەرىجىسىنى بايقاش ئارقىلىق ئوخشىمىغان قويۇقلۇقتىكى ئىپادىلەش ئۈنۈمىنى باھالىغىلى بولىدۇ. blot ياكى fluorescence بايقاش).تەجرىبە نەتىجىسىگە قارىغاندا ، ئەڭ ياخشى ئىپادىلەش ئۈنۈمى بولغان قويۇقلۇقى ئەڭ ياخشى قويۇقلۇقى قىلىپ تاللانغان.
ئۇنىڭدىن باشقا ، سىز يەنە مۇناسىۋەتلىك ئەدەبىيات ياكى باشقا تەجرىبىخانىلارنىڭ تەجرىبىسىنى ئىشلىتىپ ، مۇشۇنىڭغا ئوخشاش تەجرىبە شارائىتىدا كۆپ ئىشلىتىلىدىغان IPTG قويۇقلۇقى دائىرىسىنى چۈشىنىپ ، ئاندىن تەجرىبە ئېھتىياجىغا ئاساسەن ئەلالاشتۇرۇپ تەڭشىسىڭىز بولىدۇ.
دىققەت قىلىشقا تېگىشلىكى شۇكى ، ئەڭ ياخشى قويۇقلۇقى ئوخشىمىغان ئىپادىلەش سىستېمىسى ، نىشانلىق ئاقسىل ۋە تەجرىبە شارائىتىغا ئاساسەن ئوخشىماسلىقى مۇمكىن ، شۇڭا ئەڭ ياخشىسى ئەھۋالغا قاراپ ئەلالاشتۇرۇش كېرەك.
يىغىپ ئېيتقاندا ، DTT ئاقسىل ۋە باشقا بىئولوگىيىلىك مولېكۇلادىكى دېسففىدلىق باغلىنىشنى ئازايتىش ۋە فېرمېنتنىڭ ئاكتىپلىقى ۋە مۇقىملىقىنى قوغداشقا ئىشلىتىلىدىغان كۆپ ئىشلىتىلىدىغان ئازايتىش دورىسى.ئۇ بىئوخېمىيە ۋە مولېكۇلا بىئولوگىيە تەجرىبىسىدە كەڭ قوللىنىلدى.
يوللانغان ۋاقتى: 28-سېنتەبىردىن 20-سېنتەبىرگىچە